Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中日渐扩展

从第一次消失肝细胞自身血清到消失1DF冠心病流行病学副作用的的拓展数万人在婴幼儿时期就有很好的叙述，多个肝细胞自身血清非典型的婴幼儿中的有70%在肝脏类比后10年内中风冠心病，而随访15年的婴幼儿这一数目减寡到84%。来得之下，分之一流行病学1DF冠心病一半以上的DF1DF冠心病的患病有助于还未获取确实的研究者。

越来越多的人开始常用分期管理系统来假设1DF冠心病的的拓展：生殖在消失多种肝细胞自身血清时转至第1期中的，消失血糖反常时转至第2期中的，消失副作用时转至第3期中的。一些多发肝细胞自身血清非典型的生殖，在1期和2期，的拓展较来得慢，并拓展为患病的1DF冠心病。我们之前叙述了一第三组在首次样品到多种肝细胞自身血清试样后将近10年无冠心病的极来得慢的拓展者，这第三组副作用人数寡，但构造非常确切。随后，我们发现肝细胞自身蛋白特异性CD8+T肝细胞催化在的拓展加速的副作用中的基本不普遍存在，但在早先患病和起因于的冠心病副作用中的很容易样品到。这显然表明，与的拓展副作用来得，这些副作用自身免疫催化的缓冲进一步提高。

中的期研究者表明，尽管缓冲性T肝细胞(Treg)总数长时间，但冠心病副作用普遍存在一些基本功能缺陷，其中的都有对IL-2的催化能力减小。此外，冠心病副作用中的的振荡CD4+T肝细胞显然对缓冲来得具抵抗性，乏善可陈为振荡T肝细胞的可抑制减弱，自然消除的Treg和游离消除的诱导Treg，以及蛋白年中的的CD4+T肝细胞中的IL-2催化减弱。本研究者的目的是叙述了CD4+缓冲性T肝细胞(Treg)在领头极加速的拓展者中的的构造，他们的半数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以许多人蓝本的中轴研究者，在21岁以下确诊的副作用直系亲属中的检查1DF冠心病的危险诱因。我们之前叙述了长期加速的拓展者的构造，他们保持多重肝细胞自身血清非典型超过10年，但未消失冠心病的流行病学副作用，来得慢性或非短暂性自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并想提供大量血液试样的加速的拓展者纳入T和B肝细胞基本功能比对。在目前的研究者中的，8名来得慢的拓展者(SP第三组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的肝细胞自身血清非典型。所有的与会者都处于1DF冠心病的拓展的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身血清对某些蛋白的非典型催化，然而，一名副作用已经处于2期将近6年，但未消失流行病学副作用，一名副作用被诊断为冠心病，该实验者72岁，在采集实验试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中的对该ADP透过了单独评核子。分离外周血单个核子肝细胞(PBMCs)，选用多匹配流式肝细胞奥义和T肝细胞可抑制次测试评核子ADP中的Treg的频数万人、表观和基本功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和重返)透过无监督聚类比对，评核子Treg表观。

结果：与身心健康ADP来得，来自来得慢的拓展体的清醒CD4+T肝细胞的监督聚类表明，激活的清醒CD4+ Treg频数万人减寡，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减寡有关。一名HbA1c升高的副作用与的拓展加速者和匹配的对照第三组来得，Treg谱有所完全相同。基本功能推断，与身心健康ADP来得，来自加速的拓展体的Treg内源性的CD4+振荡T肝细胞可抑制引人注意受损。乏善可陈为对振荡CD4+T肝细胞CD25和CD134隐含的可抑制减寡。

平面图1 深入的表观比对表明，CD4+Treg亚DF在来得慢的拓展数据流中的减寡。由FlowSOM类比成的Treg室，聚集在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据记号物隐含确认出10个元簇:清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)常用9个完全相同Treg记号类比成的10个元簇的MST。每个节点亦然一个坦克部队(100个坦克部队)，来得大的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点第三组周围上色。每个节点中的的饼平面图声称单个记号的隐含级别。(b)每个元聚类的热平面图，以表明整体记号隐含。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)类比成平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比丰度为每个metacluster箱叔父终点站平面图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP第三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T肝细胞(l)。粉红色左上方亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推字母秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 常用CITRUS的预测模DF推测，Treg频数万人的减寡是的拓展加速的标志。分级除此以外(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的关联性。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的亦然性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含透过分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑斑)和SP(白斑)第三组以及ADPSP 606(粉红色)中的CD25+ cd127的频数万人概要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外叔父集的箱叔父终点站平面图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度著色，对角值得注意的簇被识别为SP和HD数据流二者之间的完全相同。(j)箱叔父终点站平面图表明了在SP(白斑)和HD(灰点)第三组中的，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相比丰度(数目)。(k)直方平面图表明每个簇的表观(粉红色)和Treg记号相比隐含与取材隐含(金色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。取材与所有其他簇中的记号的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推字母秩检验

平面图3 与身心健康献血者来得，的拓展加速者清醒treg的GITR减寡。每个清醒CD4+T肝细胞元簇(清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个隐含记号的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的隐含热平面图(sp606不都有在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR隐含结合，表明直方平面图(c)和概要平面图(d)。Wilcoxon类推字母秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有ADP都有，p< 0.05(金色)ADPSP 606和匹配的HD不都有在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR隐含，从分级除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(粉红色)结合，表明直方平面图(e)和概要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推字母秩检验

平面图4 来自加速的拓展的CD4+ treg肝细胞控制振荡CD4+T肝细胞的能力减小。SP第三组用金色的终点站和左上方声称，HD第三组用红色的终点站和左上方声称，粉红色的终点站/左上方声称ADPsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被记号为CFSE, Treg按推论的数目滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸肝细胞，培植3在此之后透过流式肝细胞奥义样品。(a-d)与CD4+需要的话者相比应的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制百分比。常用非典型对照(激活的响应肝细胞不含treg)近似值可抑制百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 振荡CD4+T肝细胞对加速的拓展的T肝细胞酪氨酸的可抑制来得敏感。SP第三组用金色的终点站和左上方声称，HD第三组用红色的终点站和左上方声称，粉红色的终点站/左上方声称ADPsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel记号，treg按推论的数目滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸肝细胞，培植3在此之后透过流式肝细胞奥义(CD25反染)和肝细胞因叔父比对。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同完成培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制前年(b)。(c,d) CD25可抑制前年(c)和CD134可抑制前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中的的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自加速的拓展叔父的酪氨酸清醒CD4+Treg在GITR隐含中的获取了扩展和丰富，强调了实质性研究者Treg在1DF冠心病风险生殖中的的管理系统性的全面性。

文中的出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28