Diabetologia：激活但功能受损的清醒Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次造出现去甲诱发重排到再次造出现1M-冠心病流行病学症状的方面率在成年人初就有不太好的所述，多个去甲诱发重排阴性的成年人中的有70%在肝细胞转换后10年内肺结核冠心病，而随访15年的成年人这一数量降低到84%。一般来说于之下，占流行病学1M-冠心病一半以上的M-1M-冠心病的发病程序还不会得不到充分的学术研究。

更多的人开始运用于分前期系统来定义1M-冠心病的方面：幼体在再次造出现多种去甲诱发重排时带入第1前期，再次造出现低血糖异常时带入第2前期，再次造出现症状时带入第3前期。一些多发去甲诱发重排阴性的幼体，在1期和2期，方面较慢，并发展为发病的1M-冠心病。我们先前所述了一小组在首次检验到多种去甲诱发重排采样后至再加10年无冠心病的极慢方面者，这小组症状多人再加，但特点十分确实。随后，我们断定去甲自身上皮细胞甲基化CD8+T巨噬细胞重排在方面很慢的症状中的基本不依赖于，但在近来发病和仍然依赖于的冠心病症状中的很易于检验到。这或许声称，与方面症状一般来说于，这些症状诱发重排的恒定大幅提高。

早期学术研究声称，尽管恒定性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但冠心病症状依赖于一些系统缺陷，其中的包括对IL-2的重排并能降低。此外，冠心病症状中的的效不宜CD4+T巨噬细胞或许对恒定更具抵抗性，表现为效不宜T巨噬细胞的抑止减弱，自然造成的Treg和肾脏造成的其会Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T巨噬细胞中的IL-2重排减弱。本学术研究的目的是所述了CD4+恒定性T巨噬细胞(Treg)在一小群极很慢方面者中的的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学术研究是一项以年轻人为基础的主干学术研究，在21岁以下就诊的症状直系亲属中的检查1M-冠心病的危险因素。我们先前所述了仍然很慢方面者的特点，他们保持多重去甲诱发重排阴性高达10年，但不会再次造出现冠心病的流行病学症状，慢性或非进行时性诱发。随后，10名继续保持无冠心病并愿意提供大量肠道采样的很慢方面者划入T和B巨噬细胞系统归纳。在现有的学术研究中的，8名慢方面者(SP小组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲诱发重排阴性。所有的参加者都处于1M-冠心病方面的1期，尽管一些人随后失去了去甲诱发重排对某些上皮细胞的阴性，然而，一名症状仍然处于2期至再加6年，但不会再次造出现流行病学症状，一名症状被诊断为冠心病，该受试者72岁，在采集实验采样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中的对该酪氨酸进行时了单独评量。除去外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，运用于多参数流式巨噬细胞法术和T巨噬细胞抑止试验评量酪氨酸中的Treg的kHz、表M-和系统。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类确认、也就是说和重生)进行时无委派聚类归纳，评量Treg表M-。

结果：与生活品质酪氨酸一般来说于，来自慢方面体的知觉CD4+T巨噬细胞的委派聚类标示造出，介导的知觉CD4+ TregkHz降低，与糖皮质激素其会的TNFR相关肽(GITR)隐含降低有关。一名HbA1c升高的症状与方面很慢者和匹配的对照小组一般来说于，Treg谱相同。系统归纳声称，与生活品质酪氨酸一般来说于，来自很慢方面体的Treg介导的CD4+效不宜T巨噬细胞抑止明显受损。表现为对效不宜CD4+T巨噬细胞CD25和CD134隐含的抑止降低。

左图1 透彻的表M-归纳标示造出，CD4+Treg亚M-在慢方面函数调用中的降低。由FlowSOM分解的Treg三楼，组织起来在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示物隐含确认造出10个元簇:知觉T巨噬细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)运用于9个不同Treg标示分解的10个元簇的MST。每个终端推选一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在终端小组区域内上色。每个终端中的的糕点左图问到单个标示的隐含级别。(b)每个元聚类的热左图，以标示造出主体标示隐含。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)分解左图，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说重元素为每个metacluster箱子线左图(重元素> 0.05%)未确定为HD和SP小组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T巨噬细胞(l)。黄色圆圈推选捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 运用于CITRUS的预测模M-证实，TregkHz的降低是方面很慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP参加者和匹配的HD参加者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l年轻人的民族特色左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含进行时除去，仿真FlowSOM年轻人。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)小组以及酪氨酸SP 606(黄色)中的CD25+ cd127的kHz概述左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱子线左图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突造出的簇被识别系统为SP和HD函数调用之间的不同。(j)箱子线左图标示造出了在SP(虎纹)和HD(灰点)小组中的，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的一般来说重元素(数量)。(k)直方左图标示造出每个簇的表M-(粉色)和Treg标示一般来说隐含与或多或再加隐含(黄色);上列，内核Treg_3;下面一路上，内核Treg_4。或多或再加与所有其他簇中的标示的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验

左图3 与生活品质献血者一般来说于，方面很慢者知觉treg的GITR降低。每个知觉CD4+T巨噬细胞元簇(知觉T巨噬细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个隐含标示的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的隐含热左图(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中的所有HD(棕色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR隐含串接，标示造出直方左图(c)和概述左图(d)。Wilcoxon配对字母秩和检验，p< 0.07(黄色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(黄色)酪氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR隐含，从分级门控，从所有HD(棕色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)串接，标示造出直方左图(e)和概述左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对字母秩检验

左图4 来自很慢方面的CD4+ treg巨噬细胞压制效不宜CD4+T巨噬细胞的并能降低。SP小组用黄色的线和圆圈问到，HD小组用黑色的线和圆圈问到，黄色的线/圆圈问到酪氨酸sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标示为CFSE, Treg按观察的数量指示剂。用抗CD3 /28微珠活化巨噬细胞，培育造出3几天后进行时流式巨噬细胞法术检验。(a-d)与CD4+需要的话者一般来说不宜的treg培育造出(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培育造出。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE抑止倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止倍数。运用于阴性对照(介导的响不宜巨噬细胞则有treg)计算抑止倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 效不宜CD4+T巨噬细胞对很慢方面的T巨噬细胞活化的抑止更尖锐。SP小组用黄色的线和圆圈问到，HD小组用黑色的线和圆圈问到，黄色的线/圆圈问到酪氨酸sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标示，treg按观察的数量指示剂。用抗CD3 /28微珠活化巨噬细胞，培育造出3几天后进行时流式巨噬细胞法术(CD25反染)和巨噬细胞因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培育造出。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE抑止花红(b)。(c,d) CD25抑止花红(c)和CD134抑止花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育造出中的的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们给造出的论证是，来自很慢方面子的活化知觉CD4+Treg在GITR隐含中的得不到了扩展和丰富，凸显了促使学术研究Treg在1M-冠心病风险幼体中的的异质性的前提。

书名造出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28